طرق تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة للمضادات الحيوية. تحديد الحساسية للأمبير محاضرة مجردة. طرق تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة للمضادات الحيوية - المفهوم والأنواع. التصنيف والجوهر والميزات
تنقسم طرق تحديد حساسية البكتيريا للمضادات الحيوية إلى مجموعتين:
1. طرق الانتشار:
. باستخدام أقراص المضادات الحيوية
. باستخدام الاختبارات الإلكترونية
2. طرق التخفيف التسلسلي:
. التخفيف في وسط المغذيات السائلة (مرق)
. التخفيف في وسط أجار
تم تطوير طرق تحديد الحساسية في النصف الثاني من الستينيات وأوائل السبعينيات من القرن العشرين ومنذ ذلك الحين لم تخضع لتغييرات أساسية من وجهة نظر منهجية.
الخطوات التالية شائعة في جميع الطرق:
- تحضير ومراقبة جودة الوسائط المغذية
- تحضير تعليق الكائنات الحية الدقيقة التي تم اختبارها (اللقاح)
- التلقيح
- لطرق الانتشار - مرحلة تطبيق أقراص أو شرائح الاختبار الإلكتروني على وسط غذائي صلب.
- الحضانة
- تسجيل وتفسير النتائج
- صياغة توصيات العلاج
تعتمد طرق الانتشار على نشر دواء مضاد للجراثيم (ABP) من مادة حاملة إلى وسط غذائي صلب ملقّح بكائن حي دقيق، وتسجيل قطر منطقة التثبيط (التأخير) لنمو الكائن الدقيق قيد الدراسة.
. هذه الطريقة أقل حساسية وأقل دقة من طريقة التخفيف التسلسلي، ولكنها تستخدم في كثير من الأحيان في الممارسة العملية بسبب بساطتها. نشر على المرجع.rf.
. يعتمد معدل انتشار أي دواء في الأجار على بنيته ووزنه الجزيئي ووجود الشوائب وتكوينه ودرجة الحموضة في الوسط.
طريقة الأقراص الورقية بالمضاد الحيوي (طريقة انتشار القرص).
. لتنفيذ هذه الطريقة، يتم استخدام أقراص قياسية تحتوي على كمية معينة من المضادات الحيوية ووسط غذائي قياسي ضروري لنمو هذا النوع من الكائنات الحية الدقيقة. ضمن حدود معينة، يتناسب قطر منطقة تثبيط النمو عكسيا مع MIC. . يتم تطبيق معلق بكتيري بكثافة معينة على سطح الأجار في طبق بيتري. . يتم وضع أقراص تحتوي على كمية معينة من المضاد الحيوي. . احتضان في ظل ظروف مواتية لكل الكائنات الحية الدقيقة المحددة. . يتم قياس أقطار مناطق تثبيط النمو حول القرص بالملليمتر (مع مراعاة قطر القرص). . يتم تقييم النتيجة باستخدام جدول خاص من خلال مقارنة قطر مناطق تثبيط النمو للمحصول المختبر مع القيم الحدودية لقطر المنطقة في الجدول. . يتم تصنيف الثقافة قيد الدراسة إلى واحدة من ثلاث فئات: حساسة وحساسة إلى حد ما ومقاومة. 
الاختبار الإلكتروني (الاختبار الإلكتروني أو طريقة قياس الإبسيلوميتر)
هذه الطريقة قريبة من الناحية التكنولوجية من طريقة القرص الورقي.
. يتم استخدام شريط ضيق من البوليمر (0.5 × 6.0 سم) كحامل، حيث يتم تطبيق تدرج تركيزات ABP (من الحد الأدنى إلى الحد الأقصى). يتم تحديد قيم تركيز ABP في كل قسم من الشريط على السطح الخارجي (المواجه للباحث).
. يحدث تثبيط نمو الكائنات الحية الدقيقة حول الشريط الحامل في المنطقة التي يكون فيها تركيز المضاد الحيوي المنتشر من الناقل أعلى من MIC.
. عند تقاطع المنطقة الإهليلجية لتثبيط النمو مع شريط الاختبار E، يتم الحصول على قيمة MIC.
يجمع الاختبار الإلكتروني بين بساطة طريقة القرص الورقي ودقة طريقة التخفيف التسلسلي. 
الطرق المستخدمة للتقييم المقارن في المختبر لأدوية العلاج المضادة للميكروبات: طريقة التخفيفات التسلسلية في الوسائط المغذية السائلة والصلبة.
طرق التخفيف التسلسلي:
. أنها تسمح للمرء بقياس حساسية الكائنات الحية الدقيقة المعزولة للعوامل المضادة للبكتيريا وتحديد MIC للدواء.
. يستخدم للتقييم المقارن للنشاط المضاد للميكروبات في المختبر للدواء الجنيس قيد التطوير والدواء الأصلي.
. لتحديد قيمة MIC، تتم إضافة تركيزات محددة من المضادات الحيوية إلى الوسط المغذي، والذي يتم بعد ذلك تلقيحه بمزرعة الكائنات الحية الدقيقة قيد الدراسة. بعد الحضانة، يتم تقييم وجود أو عدم وجود نمو واضح.
. استنادًا إلى استخدام التخفيفات التسلسلية ذات الشقين لتركيزات ABP من الحد الأقصى إلى الحد الأدنى (على سبيل المثال، من 128 ميكروجرام/مل، 64 ميكروجرام/مل، وما إلى ذلك إلى 0.5 ميكروجرام/مل، 0.25 ميكروجرام/مل و0.125 ميكروجرام/مل) .
. يتم تنفيذها في الوسائط المغذية السائلة والأجار. طريقة التخفيفات التسلسلية في وسط المغذيات السائلة (المرق)
هناك خياران لهذه الطريقة:
الطريقة الكبيرة (أنبوب الاختبار) والطريقة الدقيقة (اللوحة).
طريقة الماكرو.
. يتم إجراء الاختبار في أنابيب اختبار بحجم نهائي قدره 1 مل لكل تخفيف.
. يُسكب المرق المغذي في 0.5 مل في كل أنبوب اختبار. يتم تحديد عدد الأنابيب من خلال نطاق التخفيف المطلوب لـ ABP.
. تحضير المعلق للكائنات الحية الدقيقة المدروسة :
- يتم تحضير المعلق الفعال (~ 10 6 CFU/ml) من المعلق القياسي لكل كائن حي دقيق قيد الدراسة (~ 10 8 CFU/ml). تحضير التخفيفات التسلسلية ذات الشقين لـ ABP: - تحضير محلول مخزون من ABP للدواء الاختباري والدواء المرجعي (الأصلي) بتركيز 1000 ميكروغرام/مل وأعلى (مع الأخذ في الاعتبار محتوى المادة الفعالة) . - من المحاليل الأساسية لـ ABP للدواء الجنيس قيد الدراسة والدواء المرجعي (الأصلي)، يتم تحضير المحاليل العاملة لـ ABP باستخدام وسط غذائي سائل. (يتم حساب تركيز محاليل العمل على أساس الحد الأقصى للتركيز المطلوب في سلسلة من التخفيفات التسلسلية، مع الأخذ في الاعتبار عامل التخفيف أثناء التلقيح اللاحق بتعليق الكائنات الحية الدقيقة) - يتم تحضير التخفيفات التسلسلية: 0.5 مل من محلول العمل من يضاف ABP إلى أنبوب الاختبار الأول الذي يحتوي على 0.5 مل من المرق. اثارة. باستخدام ماصة جديدة (طرف)، انقل 0.5 مل من محلول ABP في المرق إلى أنبوب اختبار ثانٍ يحتوي على 0.5 مل من المرق، وما إلى ذلك، حتى يتم تحضير سلسلة التخفيفات المطلوبة بأكملها. تتم إزالة 0.5 مل من الأنبوب الأخير. وبالتالي، يتم الحصول على سلسلة من أنابيب الاختبار مع محاليل ABP، والتي تختلف تركيزاتها في أنابيب الاختبار المجاورة بمقدار 2 مرات. التلقيح: يضاف 0.5 مل من المعلق الميكروبي بتركيز كائنات دقيقة ~ 10 6 إلى كل أنبوب اختبار مع 0.5 مل من التخفيف المناسب لـ ABP. التركيز النهائي للكائنات الحية الدقيقة في كل أنبوب هو ~ 5x10 5 CFU / ml. . التحكم - أنبوب اختبار يحتوي على مرق ومزرعة للكائنات الحية الدقيقة (التحكم في النمو). السيطرة السلبية - أنبوب مع مرق (التحكم في العقم). . الحضانة: يتم تحضين جميع الأنابيب، المغلقة بسدادات أو أغطية، في ظل ظروف تضمن نمو الكائنات الحية الدقيقة التي تم اختبارها. . تسجيل النتائج وتفسيرها: يتم عرض أنابيب الاختبار ذات المزروعات في الضوء المنقول. تتم مقارنة نمو الثقافة في أنبوب الاختبار مع ABP مع أنبوب التحكم. - يشير وجود نمو الكائنات الحية الدقيقة في المرق (تعتيم المرق) إلى أن هذا التركيز من المضاد الحيوي غير كافٍ لقمع صلاحيته. - مع زيادة تركيز المضاد الحيوي، يتفاقم نمو الكائنات الحية الدقيقة. يعتبر أول تركيز منخفض للمضاد الحيوي (من سلسلة من التخفيفات التسلسلية)، حيث لا يتم تحديد نمو البكتيريا بصريًا، هو الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC). أدوية العلاج المضاد للبكتيريا - قارن النتائج التي تم الحصول عليها للدواء الأصلي والدواء العام قيد الدراسة. تم التوصل إلى استنتاج حول تكافؤها من حيث الطيف (قائمة الكائنات الحية الدقيقة المستخدمة) ودرجة النشاط المضاد للميكروبات (قيم MIC). 
. تحديد MBC: من الأنابيب القليلة الماضية مع تأخر النمو، تطعيم مع حلقة على قطاعات طبق بيتري. يعتبر MBC، الذي عادة ما يكون أقل بعدة تخفيفات من MIC، بمثابة تركيز الدواء في أنبوب الاختبار الأخير، والذي لم ينتج عنه نمو. . مساوئ هذه الطريقة: انخفاض الإنتاجية - يقتصر التطبيق على دراسات عدد صغير من الكائنات الحية الدقيقة.
طريقة دقيقة
.إجراء الاختبار مشابه لذلك عند استخدام الأسلوب الماكرو
الحجم النهائي يصل إلى 0.2 مل. توفر المعدات المخبرية المناسبة: لوحة مكونة من 96 بئرًا بأغطية معقمة، ويمكن إضافة محاليل عمل ABP إلى آبار اللوحة مسبقًا، ثم تخزينها مختومة في مادة البولي إيثيلين عند درجة حرارة أقل من 60 درجة مئوية حتى لحظة الاستخدام. . مزايا الطريقة: - إنتاجية عالية - إمكانية تخزين الأقراص المعدة مسبقًا على المدى الطويل - توفير المواد الاستهلاكية. نشر على المرجع.rf
طريقة التخفيفات التسلسلية في وسط أجار. مبدأ الاختبار مشابه لطريقة تخفيف المرق. تحضير المعلق للكائنات الحية الدقيقة التي تم اختبارها: - يجب أن يحتوي المعلق القياسي لكل كائن حي دقيق على ~ 10 8 CFU/ml. - يتم تخفيف المعلق الميكروبي القياسي للتجربة ~ 10 مرات للحصول على تركيز الكائنات الحية الدقيقة ~ 10 7 CFU / ml. يتم تحضير التخفيفات التسلسلية ذات الشقين من ABP للدواء الأصلي والدواء الجنيس قيد التحقيق بشكل مشابه لطريقة التخفيفات في المرق. يتم إذابة وسط الأجار وتبريده إلى درجة حرارة 45-50 درجة مئوية. . تحضير الأطباق بتخفيفات وسط الأجار وABP: قم بخلط وسط الأجار ومحاليل ABP مباشرة في طبق بيتري (للأطباق البلاستيكية التي يبلغ قطرها 90 مم، أضف 18 مل من الأجار المذاب والمبرد إلى 2 مل من محلول ABP). . التلقيح والحضانة: يتم استخدام حلقة بكتريولوجية لنقل 1-2 ميكرولتر من معلق الكائنات الحية الدقيقة قيد الدراسة إلى سطح وسط الآجار. وبالتالي، فإن جرعة اللقاح النهائية هي ~10 4 CFU (حلقة بكتريولوجية قياسية يبلغ قطرها 3 مم تحمل 1-2 ميكرولتر من السائل). . تتشكل بقعة بقطر 5-8 ملم على سطح الآجار. بعد التجفيف، يتم قلب الأطباق وتحضينها في ظروف مناسبة لنمو الكائنات الحية الدقيقة قيد الدراسة. . تسجيل النتائج وتفسيرها: تشبه طريقة تخفيف المرق. توضع أطباق بيتري على سطح داكن غير عاكس. يتم أخذ تركيز ABP الذي تسبب في تثبيط كامل للنمو المرئي على أنه MIC. . التحكم: صفائح الآجار الملقحة بتعليق مزارع الكائنات الحية الدقيقة بدون ABP (التحكم في النمو). السيطرة السلبية: لوحات أجار (التحكم في العقم). مزايا الطريقة: يمكن تحديد حساسية العديد من الكائنات الحية الدقيقة على لوحة واحدة.
نطاق البحث حول التقييم المقارن لنشاط مضادات الميكروبات في المختبر للعوامل المضادة للميكروبات العامة والأصلية.
نطاق البحث حول التقييم المقارن للنشاط المضاد للميكروبات في المختبر للأدوية المضادة للميكروبات العامة:
الهدف من الدراسة: التأكد من امتثال الدواء الجنيس للمرجع (الأصلي) من حيث الطيف (الكائنات الحية الدقيقة) ودرجة (MIC، قيمة MBC) للنشاط المضاد للميكروبات.
مجموعة الكائنات الحية الدقيقة التي تم اختبارها: 1-2 سلالات من كل كائن حي دقيق مدرج في نطاق العمل
- سلالات المجموعة المرجعية
- السلالات السريرية المعزولة في المستشفيات
يتم تحديد قيم MIC و MBC
.التحكم: الدواء المرجعي – الدواء الأصلي
النتيجة المتوقعة: MIC وMBC للأدوية المضادة للميكروبات العامة المطورة تقع ضمن النطاقات المقبولة من القيم وتتوافق تمامًا مع MIC وMBC للأدوية المرجعية (الأدوية الأصلية) فيما يتعلق بالتحصيل والسلالات السريرية.
الإجراء الخاص بالدراسات لتحديد النشاط المضاد للميكروبات في المختبر للمركبات المضادة للميكروبات الجديدة:
التقييم الأولي للحساسية للمركبات الجديدة للسلالات المرجعية لأنواع مختلفة من الكائنات الحية الدقيقة سالبة الجرام وإيجابية الجرام (4-5 سلالات لكل نوع)؛
دراسة تفصيلية لدرجة النشاط المضاد للبكتيريا للمركبات ضد سلالات الكائنات الحية الدقيقة سالبة الجرام وإيجابية الجرام من المجموعات الدولية مع آليات المقاومة المعروفة (طريقة التخفيف التسلسلي).
دراسة النشاط ضد السلالات السريرية للكائنات الحية الدقيقة الانتهازية والممرضة بالمقارنة مع الأدوية المعروفة ذات المجموعة الكيميائية المماثلة أو المماثلة في التأثير المضاد للميكروبات:
- في حالة النشاط السائد ضد الكائنات الحية الدقيقة إيجابية الجرام، السيطرة - البنسلين الطبيعي، السيفالوسبورينات من الجيل الأول والثاني، الماكروليدات، لينكوساميدات. - للنشاط ضد الكائنات الحية الدقيقة سالبة الجرام، السيطرة - بوليميكسين ب، أزتريونام. - للأدوية واسعة النطاق، السيطرة - البنسلينات شبه الاصطناعية، الأمينوغليكوزيدات، التتراسيكلين، السيفالوسبورينات من الأجيال الثالثة إلى الرابعة
. تقييم النشاط المضاد للميكروبات ضد مسببات الأمراض المسببة للمشاكل: المكورات العنقودية المقاومة للميثيسيلين، والالتهاب الرئوي العقدي المقاوم للبنزيل بنسلين، والبكتيريا المعوية المقاومة للأدوية المتعددة، والبكتيريا المقاومة للأمينوغليكوزيد من جنس الزائفة، إلخ.
يتم تحديد التركيزات العلاجية الأولية للأدوية الجديدة مع الأخذ في الاعتبار السمية المحددة في تجارب دراسة السمية الحادة.
. يتم تقييم الدرجة المقارنة للنشاط المضاد للبكتيريا للأدوية من خلال قيمة MIC أو MBC، والتي يتم تحديدها بما لا يقل عن قيمتين لجرعة البذور: الحد الأدنى - 10 4 - 10 5 CFU / ml والحد الأقصى - 10 6 - 10 9 CFU /ml، حسب نوع العامل الممرض؛ حتى الآن، لا توجد طرق تسمح لنا بالتنبؤ بشكل مؤكد بالتأثير السريري للمضادات الحيوية في علاج الأمراض المعدية. ومع ذلك، يمكن أن تكون نتائج الحساسية هذه بمثابة دليل جيد للأطباء لاختيار وضبط العلاج المضاد للبكتيريا.
جدول محتويات الكتاب مفتوح ومغلق
1. الأحياء الدقيقة الصيدلانية. موضوع ومهام علم الأحياء الدقيقة الصيدلانية.
2. الصيدلة والمستحضرات الصيدلانية: تاريخ النشأة والتطور.
3. الطب: التعريف والتصنيف.
4. تركيب الأدوية | مادة صيدلانية، سواغ.
5. الأدوية الأصلية والعامة. اسم الأدوية.
10. تأثير العوامل الضارة على الكائنات الحية الدقيقة. تأثير عامل درجة الحرارة واستخدامه في المستحضرات الصيدلانية.
11. تأثير الإشعاع على الكائنات الحية الدقيقة، أنواع الإشعاع.
12. تأثير العوامل الكيميائية الضارة على الكائنات الحية الدقيقة
13. التعقيم. مستوى ضمان العقم (SAL). معايير اختيار طريقة التعقيم.
14. التعقيم الحراري والكيميائي
15. مراقبة فعالية أجهزة التعقيم.
16. التطهير الصناعي
17. المطهرات والمطهرات. متطلبات المطهرات والمطهرات الكيميائية.
18. المواد الحافظة واستخدامها في إنتاج الأدوية
طريقة انتشار القرص
لا يتم وضع أكثر من 6 أقراص مشربة بالمضادات الحيوية على سطح وسط مغذٍ كثيف مزروع فوق حديقة متواصلة مع المحصول قيد الدراسة، على مسافة لا تقل عن 2 سم عن بعضها البعض. يتم تسجيل النتائج بعد 18-24 ساعة من الحضانة في منظم الحرارة حسب قطر منطقة عدم النمو حول الأقراص بالمضادات الحيوية. وجود نمو حول القرص يدل على عدم حساسية هذا الميكروب للمضاد الحيوي. وتستخدم جداول خاصة لتفسير النتائج.
الشكل 1. تحديد الحساسية
الكائنات الحية الدقيقة باستخدام طريقة انتشار القرص:
1- الكائنات الحية الدقيقة حساسإلى مضاد حيوي
2- الكائنات الحية الدقيقة مقاومة معتدلةإلى مضاد حيوي
3- الكائنات الحية الدقيقة مستقرإلى مضاد حيوي.
طريقة الاختبار الإلكتروني
مبدأ الطريقة. يتم تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة بشكل مشابه للاختبار بواسطة طريقة نشر القرص. والفرق هو أنه بدلاً من قرص المضاد الحيوي، يتم استخدام شريط اختبار إلكتروني يحتوي على تدرج لتركيزات المضادات الحيوية من الحد الأقصى إلى الحد الأدنى. عند تقاطع المنطقة الإهليلجية لتثبيط النمو مع شريط الاختبار E، يتم الحصول على قيمة التركيز المثبط الأدنى (MIC).
الشكل 2. تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة باستخدام الاختبارات الإلكترونية
طريقة التخفيف التسلسلي في وسط المرق
في أنابيب الاختبار التي تحتوي على 1 مل من مرق مولر-هينتون، قم بإعداد التخفيفات التسلسلية ذات الشقين من الدواء المضاد للبكتيريا، على سبيل المثال 100 ميكروجرام/مل - الأول، 50 ميكروجرام / مل - الثاني، 25 ميكروجرام / مل - الثالث، 12.5 ميكروجرام / مل - الرابع الخ ثم يضاف 0.1 مل من المعلق البكتيري المختبر إلى كل أنبوب. في نفس الوقت، يتم التحكم في النمو (1 مل من مرق مولر هينتون و 0.1 مل من المعلق البكتيري). يتم تحضين المحاصيل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة، وبعد ذلك يتم ملاحظة النتائج. يشير غياب التعكر في الوسط إلى تأخر نمو البكتيريا في وجود تركيز معين من الدواء.
الشكل 3. تحديد قيمة MIC عن طريق التخفيف في وسط غذائي سائل
الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC) هو أقل تركيز للمضاد الحيوي (بميكروجرام/مل أو ملجم/لتر) والذي يثبط تمامًا نمو البكتيريا المرئي في المختبر.
2 تحديد حساسية سلالات مختلفة من المكورات العنقودية للمضادات الحيوية باستخدام طريقة القرص القياسية
|
مضاد حيوي |
منطقة تثبيط النمو، مم |
خصائص السلالة |
الثقافة قيد الدراسة حساسة لـ _____________________________________
مقاومة معتدلة __________________________________________________________ ،
مقاومة ___________________________________________________________________.
3 تحديد الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC) للبنسلين بطريقة التخفيفات التسلسلية.
خاتمة:الحد الأدنى من تركيز البنسلين للسلالة قيد الدراسة هو _____________________________________
مزايا الطريقة: ______________________________________________________________
عيوب الطريقة: ________________________________________________________________
4 تحديد وتسجيل التأثيرات المضادة لأنواع مختلفة من البكتيريا.
يتم تلقيح الميكروب المضاد وسلالات الاختبار المتعامدة معه بشريط بطول القطر على طبق يحتوي على MPA. يتم تسجيل النتائج بعد يوم واحد من الزراعة. يتم تحديد وجود ودرجة العمل العدائي من خلال حجم مناطق تثبيط النمو في ثقافات الاختبار.
بذر الخط _________________________________
خاتمة:تم اكتشاف التأثير المضاد الأكبر في سلالات الاختبار (حدد النوع) ____________________________________________________
الدرس رقم 8
عنوان:الدرس الأخير حول الموضوع: "المراحل التاريخية في تطور علم الأحياء الدقيقة، وعلم التشكل، وعلم وظائف الأعضاء، وعلم الوراثة للكائنات الحية الدقيقة."
أشكال وأحجام البكتيريا الحقيقية. خصائص الأشكال الكروية والعصوية والملتفة للبكتيريا الحقيقية.
هيكل البكتيريا. الاختلافات الرئيسية بين الخلية بدائية النواة والخلية حقيقية النواة.
جدار الخلية للبكتيريا إيجابية الجرام وسالبة الجرام.
أنواع الاستعدادات المجهرية. تقنية تحضير الاستعدادات الثابتة.
تقنية الفحص المجهري بالمجهر الضوئي.
دراسة مورفولوجية الكائنات الحية الدقيقة في المجهر الإلكتروني.
الخصائص الصبغية للميكروبات. الأصباغ. طرق بسيطة لتلطيخ المستحضرات الثابتة.
مبادئ تصنيف بدائيات النوى المسببة للأمراض (بورجي، 2001).
أجهزة الحماية في الكائنات الحية الدقيقة.
الجراثيم، مراحل وظروف تكوين الجراثيم، الأهمية البيولوجية.
الكبسولات البكتيرية ومعناها.
الأسواط، هيكلها. أهداب. شرب الجنس.
طرق الرسم المعقدة. تقنيات جرام، زيل-نيلسن، بوري-جينس، تقنيات صبغ نيسر.
طرق دراسة الكائنات الحية الدقيقة في حالتها الحية. منافسة. مبدأ الطريقة.
اللولبيات.
الموقف المنهجي ومورفولوجيا اللولبيات. ملامح البنية التحتية والتركيب الكيميائي. طرق البحث.
الشعيات، التشكل، البنية التحتية، التركيب الكيميائي. الأنواع المسببة للأمراض. دور الشعيات في الطبيعة والطب. طرق الكشف.
تصنيف الكلاميديا. التشكل والبنية وطرق الكشف. دورة تطور الكلاميديا
الريكتسيا، التشكل، البنية التحتية، التركيب الكيميائي. الأنواع المسببة للأمراض.
الميكوبلازما.
تصنيف. التطور العرقي. طرق الكشف.
الأشكال المعيبة من الميكروبات: البروتوبلاستات، البلاستيدات الكروية، الأشكال L.
تغذية البكتيريا. المغذيات هي مصادر الكربون والنيتروجين. تصنيف البكتيريا حسب نوع التغذية الذاتية والكيميائية العضوية
عوامل النمو ومصادرها. مصادر العناصر المعدنية.
طرق وآليات نقل العناصر الغذائية عبر الغشاء.
متطلبات الطاقة للبكتيريا. طرق الحصول على الطاقة من الكائنات ذاتية التغذية (التمثيل الضوئي، التركيب الكيميائي). مصادر وطرق الحصول على الطاقة في الكائنات العضوية الكيميائية.
الأنواع الهوائية واللاهوائية للأكسدة البيولوجية في البكتيريا. البكتيريا الهوائية واللاهوائية واللاهوائية الاختيارية والبكتيريا الدقيقة. طرق خلق الظروف اللاهوائية.
شروط وتقنيات زراعة البكتيريا.
تقنية البذر على الوسائط المغذية.
أنماط وطبيعة النمو البكتيري على الوسط الغذائي الصلب والسائل.
طرق عزل المزارع النقية للبكتيريا الهوائية واللاهوائية.
خصائص الكائنات الحية الدقيقة المستخدمة لتحديد الثقافات المعزولة.
الانزيمات البكتيرية، التصنيف. طرق دراسة الخواص البيوكيميائية للكائنات الحية الدقيقة. الاستخدام العملي للنشاط البيوكيميائي في التعرف على البكتيريا
تحديد خصائص السكاروليتيك، وتكوين وسائل الإعلام هيس. تحديد خصائص التحلل البروتيني، تحديد نشاط الكاتلاز والأكسيداز.
مبدأ التشغيل وميزات استخدام أجهزة التعرف التلقائي على الثقافات البكتيرية (مزارع الدم، محلل تلقائي).
ملامح زراعة الريكتسيا والكلاميديا.
العاثيات (العاثيات). تاريخ الاكتشاف. التشكل والسمات الهيكلية والتركيب الكيميائي وخصائص العاثيات.
العاثيات الخبيثة. مراحل التفاعل مع الخلية البكتيرية. نتائج التفاعل بين العاثيات والخلية. العاثيات المعتدلة. النبوة. ظاهرة اللايسوجيني. تحويل بالعاثية.طرق عزل ومعايرة العاثيات على الوسائط المغذية الصلبة والسائلة. تطبيقات العاثيات في علم الأحياء الدقيقة والطب. تشخيص فج وكتابة فج.
الوراثة. تنظيم الجهاز الوراثي في البكتيريا (النواة، البلازميدات،
يكون
- تسلسلات، ترانسبوزونات).
مبادئ عمل الجينوم البكتيري. تنظيم الأوبرا. النمط الجيني والنمط الظاهري.
البلازميدات وتصنيف وبنية وخصائص البلازميدات. R- البلازميد، ملامح الهيكل والوظيفة. البلازميدات المسببة للبكتيريا.
التقلبات الميكروبية. التغيرات في البكتيريا، أهميتها، المظاهر والخصائص الرئيسية (الطبيعة غير الوراثية، القدرة على التكيف، التردد العالي للتغيرات المباشرة والعكسية، العديد من العوامل المحفزة).
التباين الوراثي. الطفرات وتصنيفها.
مفهوم الهندسة الوراثية واستخدام طرقها في علم الأحياء الدقيقة والتكنولوجيا الحيوية.
إنتاج واستخدام اللقاحات والسيتوكينات المعدلة وراثيا.
التدابير المضادة للميكروبات. تأثير العوامل البيئية على الميكروبات. عمل العوامل الفيزيائية (درجة الحرارة، التجفيف، الإشعاع، الموجات فوق الصوتية، الضغط الأسموزي). عمل العوامل الكيميائية.
أهداف وطرق ووسائل وأشياء التعقيم والتطهير في الممارسة الطبية والميكروبيولوجية. مراقبة جودة التطهير. السيطرة على التعقيم والعقم. طرق التنفيذ.
مطهر. تعريف. العوامل المطهرة، المتطلبات، الأصل، الخصائص، المجموعات، آليات العمل على الميكروبات.
أنواع المطهرات. المطهرات العلاجية. المطهرات الوقائية.
أدوية العلاج الكيميائي. ملكيات. المجموعات الرئيسية لأدوية العلاج الكيميائي. آليات العمل على البكتيريا. مفهوم الانتقائية و"أهداف" العمل.
المضادات الحيوية.
تعريف. منتجي المضادات الحيوية.
المضادات الحيوية الاصطناعية وشبه الاصطناعية.
المجموعات الرئيسية للمضادات الحيوية حسب التركيب الكيميائي. المضادات الحيوية بيتا لاكتام التتراسيكلين. أمينوغليكوزيدات. الماكروليدات والأزوليدات. أنساميسين (ريفامبيسين).9
عنوان:ليفوميسيتين. المضادات الحيوية الفلوروكينولون.
لينكومايسين. البوليميكسينات. جلايكوبيبتيدات
تصنيف المضادات الحيوية على أساس آلية العمل على الخلية البكتيرية. . آليات مقاومة الكائنات الحية الدقيقة للأدوية المضادة للبكتيريا.
طرق تحديد حساسية البكتيريا للمضادات الحيوية وأدوية العلاج الكيميائي الأخرى.
تقنية ضبط وتسجيل وتقييم الحساسية باستخدام طريقة القرص والاختبار الإلكتروني والتخفيفات التسلسلية.
رقم الدرس
العوامل المسببة للأمراض. طرق تحديد الفوعة، الوحدات. إلزام الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض والمسببة للأمراض بشكل مشروط.
سمية وسمية الكائنات الحية الدقيقة.
السموم الداخلية، الخصائص، الإنتاج، التطبيق. السموم الخارجية، خواصها، إنتاجها، وحدات القياس. أنواع السموم الخارجية وآلية عملها.
دور الكائنات الحية الدقيقة في تطور ومسار الأمراض المعدية. العوامل الوراثية. الحالة التشريحية والفسيولوجية للجسم. دور الظروف المعيشية في تطور ومسار الأمراض المعدية. العوامل الطبيعية. العوامل الاجتماعية.
تصنيف العمليات المعدية حسب شدتها وطبيعة العامل الممرض ومصدر العدوى وطريقة انتقال العامل الممرض وآلية العدوى وانتشارها.
تصنيف العمليات المعدية حسب توطين التركيز الميكروبي ومدة الدورة وتكرار الإصابة.
ديناميات العملية المعدية وميزاتها.
طريقة البحث البيولوجي (التجريبي) ومراحله وتقييمه. حيوانات المختبر.
طرق العدوى. العمل المختبري.
1 دراسة البكتيريا الطبيعية.أ) البذر لدراسة البكتيريا الطبيعية لجلد اليدين على وسط إندو وأجار الدم
طريقة النسخ
مبدأ الطريقة:
بلل قطع معقمة من ورق الترشيح 1x1 سم في طبق بيتري بمحلول ملحي معقم. حل. باستخدام ملقط معقم، ضعي قطعة من الورق على سطح الجلد المراد فحصه لمدة 0.5 دقيقة. ضع الورقة على سطح الوسط المغذي الكثيف (الطباعة) لمدة دقيقة واحدة. قم بإزالة الورقة. احتضان اللوحات مع المطبوعات عند 37 درجة مئوية لمدة 24-48 ساعة.
|
ج) إجراء سجل التلقيح بالميكروفلورا، وإعداد المستحضرات من أنواع مختلفة من المستعمرات، وصبغة جرام، والمجهر (في التلقيحات التوضيحية). _______________________ حساب التلقيح بالميكروفلورا: _______________ _______________________ |
ج) إجراء سجل التلقيح بالميكروفلورا، وإعداد المستحضرات من أنواع مختلفة من المستعمرات، وصبغة جرام، والمجهر (في التلقيحات التوضيحية). _______________________ حساب التلقيح بالميكروفلورا: _______________ _______________________ |
2 الفحص المجهري للتحضيرات:تحضير______________. تلوينتقييم الالتصاق
1 دراسة البكتيريا الطبيعية.ه
القولونية
3 من خلال قدرتها على الامتصاص على سطح خلايا الدم الحمراء
1. تتم إضافة ثقافة اختبار الكائنات الحية الدقيقة إلى تعليق كريات الدم الحمراء. بعد الحضانة، يتم تحضير المسحات، وتلوينها، وتحديد متوسط عدد البكتيريا الممتصة في خلية دم حمراء واحدة تحت المجهر.
في هذه الحالة، يتم استخدام خلايا الدم الحمراء كخلية نموذجية للكائنات الحية الدقيقة الحساسة.
2.تحديد الانزيمات الغازية في المكورات العنقودية
مبدأ الطريقة: تتم إضافة مزرعة الاختبار إلى أنبوب اختبار يحتوي على الفيبرين (جلطة دموية يتم غسلها من خلايا الدم الحمراء). بعد الحضانة في منظم الحرارة، يتم أخذ النتيجة بعين الاعتبار. إذا كانت النتيجة إيجابية، تذوب الجلطة.
3.هيالورونيداز
مبدأ الطريقة: تتم إضافة ثقافة الاختبار إلى أنبوب اختبار يحتوي على حمض الهيالورونيك (HA). بعد الحضانة في منظم الحرارة، يتم إضافة كاشف يسبب تخثر HAA وتؤخذ النتيجة في الاعتبار. إذا كانت النتيجة إيجابية (بسبب انهيار HAA)، لا تتكون جلطة.
4.ليسيتوفيتليز (ليسيثيناز)
مبدأ الطريقة: يتم تلقيح مزارع المكورات العنقودية المعزولة على أجار ملح الصفار، الذي يحتوي على 7.5% كلوريد الصوديوم ومعلق صفار البيض. إذا كانت النتيجة إيجابية، تتشكل هالة قوس قزح حول مستعمرات المكورات العنقودية الخبيثة بسبب تحلل الليسيثين الموجود في صفار بيضة الدجاج.
الاستنتاج: (اذكر إنزيمات الضراوة لكل من السلالتين المدروستين) ____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
السموم البكتيرية
السمية _______________________________________________________
السمية _________________________________________________________________________________
ذيفان داخلي _______________________________________________________
الصدمة السمية الداخلية _____________________________________________________________
التطبيق العملي للسموم الداخلية:
السموم الخارجية _______________________________________________________
الأناتوكسين _________________________________________________________
مخطط للحصول على السموم الخارجية والتوكسويد.
1.____________________________________________________________________________________________
2.____________________________________________________________________________________________
4.____________________________________________________________________________________________
الاستخدام العملي للسموم:
1.____________________________________________________________________________________________
2.____________________________________________________________________________________________
3.____________________________________________________________________________________________
الاختبار الإلكتروني) هي طريقة راسخة لاختبار مدى حساسية المضادات الحيوية في المختبرات حول العالم. ويستخدم على نطاق واسع في دراسات المقاومة في كل من عيادات التشخيص والاختبار. الاختبار هو طريقة كمية لتحديد هيئة التصنيع العسكريالأدوية المضادة للفطريات والبكتيريا للعوامل المعدية، بما في ذلك الإنتانية، وهو أمر مهم بشكل خاص للمرضى المصابين بأمراض خطيرة. تحتوي هذه الطريقة حاليًا على أكثر من 100 مضاد حيوي لاختبار مجموعة من البكتيريا الهوائية والكائنات الدقيقة مثل المكورات الرئوية، والمستدمية النزلية، والبكتيريا الحلزونية، والمكورات السحائية، والمكورات البنية، واللاهوائية، والفطريات، والمتفطرات. الاختبار الإلكترونييجعل من الممكن الاستخدام الرشيد للمضادات الحيوية التي توفر أفضل النتائج للمرضى، وكذلك تصحيح نظام العلاج بعد الوصف التجريبي للأدوية. يعد الاختبار مهمًا للغاية لتحديد جرعة المضادات الحيوية لدى المرضى الذين يعانون من مواقع العدوى التي يصعب الوصول إليها طوبوغرافيًا (مثل التهاب الشغاف)، وفي بعض حالات عدوى المستشفيات، والالتهابات المزمنة، وفي المرضى الذين يعانون من نقص المناعة.
الاختبار الإلكتروني- تكنولوجيا فريدة من نوعها حاصلة على براءة اختراع. مبدأه هو أن يتم تطبيق التخفيفات المتتالية للمضاد الحيوي على شريط اختبار بلاستيكي من الأصغر إلى الأكبر ويسمح لك بتحديد النشاط المضاد للميكروبات للعوامل البكتيرية، سواء غريب الأطوار أو غير غريب الأطوار، بدقة من 15 تخفيفًا على الأقل.
إجراء الاختبار بسيط: يتم وضع شريط به كاشف على سطح أجار مُلقح من التخفيف القياسي. بعد الحضانة، تتم قراءة النتيجة باستخدام مقياس التخفيف المطبق على اللوحة عند تقاطع منطقة تثبيط النمو، على شكل قطع ناقص، مع شريط الاختبار.
الاختبار الإلكترونييتمتع بعدد من المزايا في مراقبة المقاومة، لأنه يحتوي على تدرج تركيز يمكن أن يُظهر أدنى التغيرات في الحساسية. يغطي عرض تدرج التركيز في هذا الاختبار الاختلافات بحساسية 
مقاومة الكائنات الحية الدقيقة ويحدد مستويات المقاومة المنخفضة والعالية.
هذا هو الاختبار الأكثر حساسية المتاحة اليوم. الاختبار الإلكترونيهي طريقة كبيرة يمكن تنفيذها بسهولة في المختبر لتحديد الحساسية. في عصر اكتشاف الالتهابات الجديدة باستمرار وزيادة مقاومة الكائنات الحية الدقيقة للأدوية المضادة للبكتيريا، الاختبار الإلكترونيالمعترف بها في جميع أنحاء العالم باعتبارها ابتكارًا رئيسيًا في تحديد النشاط المضاد للميكروبات.
يحتوي كتالوج Biomerye 2013 في الصفحات 33 - 36 على قائمة كاملة بالاختبارات الإلكترونية (100 عنصر):
- مضاد للجراثيم
- مضاد للفطريات
- مضاد السل
- لتحديد المقاومة للأدوية المتعددة
| اسم | قطة. لا. | |
 |
مضاد للفطريات |
20306 |
| 19364 | ||
 |
20307 | |
 |
20457 | |
 |
21040 | |
 |
21053 | |
 |
21055 | |
| 19361 | ||
| 19362 | ||
|
تحتوي عبوة الرقائق على خرطوشة رغوية تحتوي على 30 شريطًا ومجففًا؛ يخزن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية أو في غرفة خاضعة للرقابة. ر درجة مئوية |
19363 | |
|
العبوة عبارة عن بليستر (عبوة مقطعية بلاستيكية) مكونة من 10 خلايا تحتوي كل منها على 3 شرائح (مضادة للبكتيريا). التخزين عند -20 درجة مئوية |
19365 | |
|
العبوة عبارة عن بليستر (عبوة مقطعية بلاستيكية) مكونة من 10 خلايا كل خلية تحتوي على 3 شرائح (مضادة للبكتيريا). التخزين عند -20 درجة مئوية |
19366 | |
|
العبوة عبارة عن بليستر (عبوة مقطعية بلاستيكية) مكونة من 10 خلايا كل منها تحتوي على 3 شرائط (مضادة للبكتيريا). التخزين عند -20 درجة مئوية |
19359 | |
|
تحتوي عبوة الرقائق على خرطوشة رغوية تحتوي على 30 شريطًا ومجففًا؛ يخزن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية أو في غرفة خاضعة للرقابة. ر درجة مئوية |
19371 | |
|
تحتوي عبوة الرقائق على خرطوشة رغوية تحتوي على 30 شريطًا ومجففًا؛ يخزن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية أو في غرفة خاضعة للرقابة. ر درجة مئوية |
19375 | |
|
تحتوي عبوة الرقائق على خرطوشة رغوية تحتوي على 30 شريطًا ومجففًا؛ يخزن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية أو في غرفة خاضعة للرقابة. ر درجة مئوية |
19374 | |
|
تحتوي عبوة الرقائق على خرطوشة رغوية تحتوي على 30 شريطًا ومجففًا؛ يخزن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية أو في غرفة خاضعة للرقابة. ر درجة مئوية |
19373 | |
|
العبوة عبارة عن بليستر (عبوة مقطعية بلاستيكية) مكونة من 10 خلايا، كل خلية تحتوي على 3 شرائح (مضادة للبكتيريا). التخزين عند -20 درجة مئوية |
19372 | |
|
العبوة عبارة عن بليستر (عبوة مقطعية بلاستيكية) مكونة من 10 خلايا، كل خلية تحتوي على 3 شرائح (مضادة للبكتيريا). التخزين عند -20 درجة مئوية |
19370 | |
 |
تحتوي عبوة الرقائق على خرطوشة رغوية تحتوي على 30 شريطًا ومجففًا؛ تخزين 2-8 درجة مئوية أو في غرفة تسيطر عليها. ر درجة مئوية |
19360 |
طرق جديدة لتحديد حساسية البكتيريا للعلاج الكيميائي. الأنظمة الآلية لتسجيل نتائج طريقة التخفيف التسلسلية. الاختبار الإلكتروني.
حالياً تم تطوير الأنظمة المحوسبة، تجري تلقائيا عزل البكتيريا من عينات الاختباروتحديد مدى حساسيتهم للأدوية المختلفة. ميزتها الرئيسية هي تحرير موظفي المختبرات البكتريولوجية من حجم كبير من الأبحاث الروتينية والتوحيد الواضح للنتائج التي تم الحصول عليها.
إن الاستخدام الواسع النطاق لهذه الأجهزة في الممارسة المحلية يحد من تكلفتها. من بين الطرق الأكثر سهولة هي الأكثر انتشارًا نظام العمارو الاختبار الإلكترونييجمع بين مزايا طريقة التخفيف التسلسلي وطريقة القرص.
طرق جديدة لتحديد حساسية البكتيريا للعلاج الكيميائي. الأنظمة الآلية لتسجيل نتائج طريقة التخفيف التسلسلي">
الأنظمة الآلية لتسجيل نتائج طريقة التخفيف التسلسلية(على سبيل المثال، Baxter MicroScan AutoSCAN-4) - أنظمة حضانة آلية مزودة بمقاييس ضوئية مدمجة تسجل نمو البكتيريا أو غيابها بعد 24 ساعة من إدخال الكائنات الحية الدقيقة في آبار الألواح الدقيقة. يعتمد مبدأ التشغيل على مراعاة الفرق في الكثافة الضوئية للوسط في الآبار التي يوجد بها نمو بكتيري وفي الآبار التي لا يوجد فيها نمو. حاليًا، تم تطوير الأجهزة (على سبيل المثال، VITEK) التي توفر النتائج خلال 4-10 ساعات.
نظام العمارعبارة عن لوحة بها آبار، تحتوي كل منها على أقراص ورقية مرشحة تحتوي على تركيزات مختلفة من العوامل المضادة للميكروبات ومشربة بمؤشر Alamar Blue. بعد إدخال البكتيريا إلى البئر، يتحول القرص إلى اللون الأزرق، ومع نموها الإضافي، يتغير لونه إلى اللون الوردي. ترتيب وضع الأقراص في الآبار يتوافق مع التخفيفات التسلسلية المزدوجة للدواء. البئر الأخيرة ذات القرص الأزرق، التي تسبق الآبار ذات الأقراص الوردية، تتوافق مع MIC الخاص بالدواء.
الاختبار الإلكتروني[من الإنجليزية القطع الناقص، القطع الناقص، لأنه في حالة وجود حساسية، يتم تشكيل منطقة تثبيط النمو على شكل بيضاوي] - تعديل لطريقة القرص، ولكن بدلاً من الأخيرة، يتم استخدام شرائح من ورق الترشيح مشربة بتركيزات مختلفة من الأدوية، كل منها من هذه المناطق لديها علامات مناسبة. يتم وضع الشرائط على سطح الآجار. إذا كانت البكتيريا حساسة لعمل الدواء، يتم تشكيل منطقة إهليلجية حول مناطق الشريط التي تحتوي على تركيزاته المثبطة. شكله يرجع إلى عمل عدة تركيزات من الدواء في وقت واحد. يتوافق MIC مع قسم الشريط حيث يتم عبوره بحدود منطقة تثبيط النمو.
تناقش المحاضرة الطرق الرئيسية لتحديد الحساسية في المختبرالكائنات الحية الدقيقة إلى الأدوية المضادة للميكروبات (انتشار القرص، الاختبارات الإلكترونية، طرق التخفيف). وتنعكس النهج المتبعة في وصف المضادات الحيوية التجريبية والسببية في الممارسة السريرية. وتناقش قضايا تفسير نتائج تحديد الحساسية من وجهة نظر سريرية وميكروبيولوجية.
حاليًا، في الممارسة السريرية، هناك مبدأان لوصف الأدوية المضادة للبكتيريا: التجريبية والسببية. وصفة المضادات الحيوية التجريبيةبناءً على معرفة الحساسية الطبيعية للبكتيريا، والبيانات الوبائية حول مقاومة الكائنات الحية الدقيقة في المنطقة أو المستشفى، بالإضافة إلى نتائج الدراسات السريرية الخاضعة للرقابة. الميزة التي لا شك فيها للوصف التجريبي للعلاج الكيميائي هي إمكانية البدء السريع بالعلاج. وبالإضافة إلى ذلك، فإن هذا النهج يلغي تكاليف البحوث الإضافية.
ومع ذلك، إذا كان العلاج المضاد للبكتيريا المستمر غير فعال، في حالة التهابات المستشفيات، عندما يكون من الصعب تخمين العامل الممرض وحساسيته للمضادات الحيوية، فإنهم يميلون إلى إجراء العلاج الموجه للسبب. وصفة طبية للمضادات الحيويةولا يقتصر الأمر على عزل العامل المعدي من المواد السريرية فحسب، بل يشمل أيضًا تحديد حساسيته للمضادات الحيوية. لا يمكن الحصول على البيانات الصحيحة إلا إذا تم تنفيذ جميع مراحل البحث البكتريولوجي بكفاءة: بدءًا من أخذ المواد السريرية ونقلها إلى المختبر البكتريولوجي وتحديد العامل الممرض وتحديد حساسيته للمضادات الحيوية وتفسير النتائج التي تم الحصول عليها.
السبب الثاني للحاجة إلى تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة للأدوية المضادة للبكتيريا هو الحصول على بيانات وبائية عن بنية مقاومة مسببات الأمراض من العدوى المكتسبة من المجتمع والعدوى المستشفيات. ومن الناحية العملية، تُستخدم هذه البيانات في الوصفات التجريبية للمضادات الحيوية، وكذلك في تكوين كتيبات وصفات المستشفيات.
طرق تحديد الحساسية للمضادات الحيوية
تنقسم طرق تحديد حساسية البكتيريا للمضادات الحيوية إلى مجموعتين: طرق الانتشار والتخفيف.
عند تحديد الحساسية بطريقة الانتشار على القرص، يتم وضع معلق بكتيري بكثافة معينة (عادةً ما يعادل معيار تعكر ماكفارلاند 0.5) على سطح أجار في طبق بتري ثم يتم وضع أقراص تحتوي على كمية معينة من المضاد الحيوي . يؤدي انتشار المضاد الحيوي في الأجار إلى تكوين منطقة قمع نمو الكائنات الحية الدقيقة حول الأقراص. بعد تحضين الأطباق في منظم الحرارة عند درجة حرارة 35 درجة مئوية -37 درجة مئوية طوال الليل، يتم أخذ النتيجة في الاعتبار عن طريق قياس قطر المنطقة المحيطة بالقرص بالملليمتر ().
الشكل 1.تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة باستخدام طريقة انتشار القرص.
يتم تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة باستخدام الاختبار الإلكتروني بشكل مشابه للاختبار بواسطة طريقة نشر القرص. الفرق هو أنه بدلاً من القرص الذي يحتوي على مضاد حيوي، يتم استخدام شريط اختبار إلكتروني يحتوي على تدرج لتركيزات المضاد الحيوي من الحد الأقصى إلى الحد الأدنى (). عند تقاطع المنطقة الإهليلجية لتثبيط النمو مع شريط الاختبار E، يتم الحصول على قيمة التركيز المثبط الأدنى (MIC).
الشكل 2.تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة باستخدام الاختبارات الإلكترونية.
الميزة التي لا شك فيها لطرق الانتشار هي سهولة الاختبار وإمكانية الوصول إليها في أي مختبر بكتريولوجي. ومع ذلك، ونظرًا لارتفاع تكلفة الاختبارات الإلكترونية، عادةً ما يتم استخدام طريقة نشر القرص في العمل الروتيني.
طرق التربيةتعتمد على استخدام التخفيفات التسلسلية المزدوجة لتركيزات المضادات الحيوية من الحد الأقصى إلى الحد الأدنى (على سبيل المثال، من 128 ميكروجرام / مل، 64 ميكروجرام / مل، وما إلى ذلك إلى 0.5 ميكروجرام / مل، 0.25 ميكروجرام / مل و 0.125 ميكروجرام / مل). في هذه الحالة، تتم إضافة المضاد الحيوي بتركيزات مختلفة إلى وسط غذائي سائل (مرق) أو إلى أجار. يتم بعد ذلك وضع معلق بكتيري ذو كثافة معينة، يتوافق مع معيار تعكر ماكفارلاند البالغ 0.5، في مرق مضاد حيوي أو على سطح طبق أجار. بعد الحضانة طوال الليل عند درجة حرارة 35 درجة مئوية -37 درجة مئوية، يتم تسجيل النتائج التي تم الحصول عليها. يشير وجود نمو الكائنات الحية الدقيقة في المرق (تعكر المرق) أو على سطح الأجار إلى أن التركيز المعطى للمضاد الحيوي غير كافٍ لقمع صلاحيته. مع زيادة تركيز المضاد الحيوي، يتدهور نمو الكائنات الحية الدقيقة. يعتبر أول تركيز منخفض للمضاد الحيوي (من سلسلة من التخفيفات التسلسلية)، حيث لا يتم تحديد نمو البكتيريا بصريًا، هو الحد الأدنى من التركيز المثبط (MIC). يتم قياس MIC بالمجم / لتر أو ميكروجرام / مل ().
الشكل 3.تحديد قيمة MIC عن طريق التخفيف في وسط غذائي سائل.
تفسير نتائج الحساسية
بناءً على البيانات الكمية التي تم الحصول عليها (قطر منطقة تثبيط نمو المضادات الحيوية أو قيمة MIC)، يتم تقسيم الكائنات الحية الدقيقة إلى حساسة ومقاومة متوسطة ومقاومة (). للتمييز بين هذه الفئات الثلاث من الحساسية (أو المقاومة) ما يسمى تركيزات الحدود(نقطة التوقف) مضاد حيوي (أو القيم الحدودية لقطر منطقة تثبيط نمو الكائنات الحية الدقيقة).
الشكل 4.تفسير نتائج تحديد حساسية البكتيريا وفق قيم MIC.
التركيزات الحدودية ليست قيمًا ثابتة. ويمكن تنقيحها اعتمادًا على التغيرات في حساسية المجموعة الميكروبية. يتم تطوير ومراجعة معايير التفسير من قبل كبار المتخصصين (المعالجين الكيميائيين وعلماء الأحياء الدقيقة) الذين هم أعضاء في اللجان الخاصة. إحداها هي اللجنة الوطنية الأمريكية لمعايير المختبرات السريرية (NCCLS). حاليًا، معايير NCCLS معترف بها في جميع أنحاء العالم وتستخدم كمعايير دولية لتقييم نتائج تحديد مدى حساسية البكتيريا في الدراسات الميكروبيولوجية والسريرية متعددة المراكز.
هناك طريقتان لتفسير نتائج الحساسية: الميكروبيولوجية والسريرية. يعتمد التفسير الميكروبيولوجي على تحليل توزيع تركيزات المضادات الحيوية التي تمنع بقاء البكتيريا. يعتمد التفسير السريري على تقييم فعالية العلاج بالمضادات الحيوية.
الكائنات الحية الدقيقة الحساسة (حساسة)
سريريا، تصنف البكتيريا على أنها حساسة (مع الأخذ بعين الاعتبار المعلمات التي تم الحصول عليها في المختبر) ، إذا لوحظ تأثير علاجي جيد عند علاج الالتهابات التي تسببها هذه الكائنات الحية الدقيقة بجرعات قياسية من المضاد الحيوي.
في غياب معلومات سريرية موثوقة، يعتمد التقسيم إلى فئات الحساسية على حساب مشترك للبيانات التي تم الحصول عليها في المختبر، والحركية الدوائية، أي. على تركيزات المضادات الحيوية التي يمكن تحقيقها في موقع الإصابة (أو في مصل الدم).
الكائنات الحية الدقيقة المقاومة
يتم تصنيف البكتيريا على أنها مقاومة (مقاومة) عندما لا يكون هناك تأثير للعلاج، عند علاج العدوى التي تسببها هذه الكائنات الحية الدقيقة، حتى عند استخدام الجرعات القصوى من المضادات الحيوية. هذه الكائنات الحية الدقيقة لديها آليات المقاومة.
الكائنات الحية الدقيقة ذات المقاومة المتوسطة (المتوسطة)
سريريًا، تشير المقاومة المتوسطة في البكتيريا إلى أن العدوى التي تسببها هذه السلالات قد يكون لها نتائج علاجية مختلفة. ومع ذلك، قد يكون العلاج ناجحًا إذا تم استخدام المضاد الحيوي بجرعات أعلى من القياسية، أو إذا كانت العدوى موضعية في منطقة يتراكم فيها الدواء المضاد للبكتيريا بتركيزات عالية.
من وجهة نظر ميكروبيولوجية، تشتمل البكتيريا ذات المقاومة المتوسطة على مجموعة سكانية فرعية تقع، وفقًا لقيم MIC أو أقطار المنطقة، بين الكائنات الحية الدقيقة الحساسة والمقاومة. في بعض الأحيان يتم دمج السلالات المتوسطة المقاومة والبكتيريا المقاومة في فئة واحدة من الكائنات الحية الدقيقة المقاومة.
تجدر الإشارة إلى أن التفسير السريري للحساسية البكتيرية للمضادات الحيوية مشروط، لأن نتيجة العلاج لا تعتمد دائما فقط على نشاط الدواء المضاد للبكتيريا ضد العامل الممرض. ويدرك الأطباء الحالات التي تكون فيها الكائنات الحية الدقيقة مقاومة، وفقًا للبحث في المختبر، حصل على تأثير سريري جيد. على العكس من ذلك، إذا كان العامل الممرض حساسًا، فقد يكون العلاج غير فعال.
في بعض الحالات السريرية، عندما تكون نتائج اختبار الحساسية بالطرق التقليدية غير كافية، يتم تحديد الحد الأدنى لتركيز مبيد الجراثيم.
الحد الأدنى لتركيز مبيد الجراثيم (MBC)- أقل تركيز للمضاد الحيوي (مجم/لتر أو ميكروجرام/مل) والذي تم أثناء الدراسة في المختبريتسبب في موت 99.9% من الكائنات الحية الدقيقة من المستوى الأولي خلال فترة زمنية معينة.
يتم استخدام قيمة MBC في العلاج بالمضادات الحيوية التي لها تأثير جراثيم، أو في حالة عدم وجود تأثير من العلاج المضاد للبكتيريا في فئة خاصة من المرضى. الحالات الخاصة لتحديد MBC قد تكون، على سبيل المثال، التهاب الشغاف الجرثومي، التهاب العظم والنقي، أو الالتهابات العامة في المرضى الذين يعانون من حالات نقص المناعة.
في الختام، أود أن أشير إلى أنه لا توجد اليوم طرق تسمح لنا بالتنبؤ بثقة مطلقة بالتأثير السريري للمضادات الحيوية في علاج الأمراض المعدية. ومع ذلك، يمكن أن تكون نتائج الحساسية هذه بمثابة دليل جيد للأطباء لاختيار وضبط العلاج المضاد للبكتيريا.
الجدول 1.معايير لتفسير الحساسية البكتيرية